?大家好，最近實驗室的BCA儀器壞了，偶然發現nanodrop也可以測蛋白濃度，省不少時間！本方法原理是：紫外吸收??

友情提示：由于表格的存在，用電腦看本推文，效果更好

紫外吸收法

較為靈敏50～100mg

快速 5～10分鐘

蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收

各種嘌吟和嘧啶；各種核苷酸

用于層析柱流出液的檢測；核酸的吸收可以校正

1. 選擇A280波長,測蛋白濃度

2. 準備工作區域，確保工作臺面干凈，并清潔使用的移液器和試管。

3. 使用純水或緩沖液，而不是待測的蛋白質樣品，進行blank校準。將一小量純水或緩沖液（與待測樣品相同的體積）放置到NanoDrop測量蓋片上。

4. 使用無菌紙巾輕輕擦拭測量蓋片以去除表面的雜質。

5. 將測量蓋片放置到NanoDrop儀器的測量槽中，并關閉儀器蓋子。

6. 在儀器軟件中選擇蛋白質濃度的測量模式。

7. 點擊測量按鈕開始進行blank校準，并等待一段時間直到校準完成。

8. 校準完成后，移除blank樣品并清潔測量蓋片。

9. 取一小量待測的蛋白質樣品（通常約為1-2微升）并將其轉移到新的NanoDrop測量蓋片上。

10. 使用無菌紙巾輕輕擦拭測量蓋片以去除表面的雜質。

11. 將測量蓋片放置到NanoDrop儀器的測量槽中，并關閉儀器蓋子。

12. 點擊測量按鈕開始測量，并等待一段時間直到測量完成。

13. 讀取測量結果，包括吸光度值和蛋白質濃度。通常，吸光度值在280納米波長處進行測量，該波長對應著蛋白質的最大吸收峰。

如果想更準確一些，可以加上自己的標品，測一遍標品的濃度，制作標曲。

附：

五種蛋白質測定方法比較如下：

方法	靈敏度	時間	原理	干擾物質	說明
凱氏定氮法（Kjedahl法）	靈敏度低，適用于0.2~ 1.0mg氮，誤差為 ±2％	費時 8～10小時	將蛋白氮轉化為氨，用酸吸收后滴定	非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白質而分離）	用于標準蛋白質含量的準確測定；干擾少；費時太長
雙縮脲法（Biuret法）	靈敏度低1～20mg	中速 20~30分鐘	多肽鍵＋堿性Cu2＋?紫色絡合物	硫酸銨；Tris緩沖液；某些氨基酸	用于快速測定，但不太靈敏；不同蛋白質顯色相似；BCA鰲合Cu+作為顯色劑，產生藍紫色并在562nm有吸收峰
紫外吸收法	較為靈敏50～100mg	快速 5～10分鐘	蛋白質中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收	各種嘌吟和嘧啶；各種核苷酸	用于層析柱流出液的檢測；核酸的吸收可以校正
Folin－酚試劑法（Lowry法）	靈敏度高～5mg	慢速 40～60分鐘	雙縮脲反應；磷鉬酸－磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原	硫酸銨；Tris緩沖液；甘氨酸；各種硫醇	耗費時間長；操作要嚴格計時；顏色深淺隨不同蛋白質變化
考馬斯亮藍法(Bradford法)	靈敏度最高1～5mg	快速5～15分鐘	考馬斯亮藍染料與蛋白質結合時，其lmax由465nm變為595nm	強堿性緩沖液；TritonX-100;SDS	最好的方法；干擾物質少；顏色穩定；顏色深淺隨不同蛋白質變化 ?