引物（Primer）

• 引物（Primer）是一小段單鏈 DNA（通常 18~25 個堿基），與模板 DNA 的特定位點互補。包括：Forward Primer（正向引物）和 Reverse Primer（反向引物）。PCR工程中可為 DNA 聚合酶提供“啟動點”，定義了 PCR 擴增產物的兩端，控制擴增區域的長度和特異性。

特性	內容
類型	單鏈 DNA（通常為 18–30 個堿基）
序列來源	根據目標基因序列，在軟件或數據庫中人工設計
功能	提供起始位點，與模板 DNA 上特定區域互補，用于啟動 DNA 聚合酶復制
合成方法	固相磷酸三酯法（Phosphoramidite 化學合成）

pcr引物制造

• PCR 引物（Primer）是實驗中用于“起始 DNA 合成”的短鏈 DNA 分子。制造引物的過程本質上是化學合成寡核苷酸。PCR 引物由專門的核酸合成儀器制造，大致過程如下：

步驟 1：設計引物序列（人工）

你先根據目的基因，在電腦上設計出需要的 5’ → 3’ 的 DNA 序列，比如：

Forward：5’-AGTGGGGGGACATCAAGCAGCCATGCAAA-3’
Reverse：5’-TGCTATGTCACTTCCCCTTGGTTCTCT-3’

步驟 2：用“磷酰胺法”合成 DNA

• 從 3’ 端 → 5’ 端一堿基一堿基地拼出來的,每輪合成只加一個堿基，重復進行 N 輪（N = 引物長度）：

步驟	說明
① 固相支持物	通常用硅珠或樹脂，固定第一個堿基的 3’ 端
② 活化	添加下一個磷酰胺單體（例如保護好的 dA、dT、dC、dG）
③ 縮合	用催化劑讓新堿基接到前一堿基的 5’ 位上形成磷酸二酯鍵
④ 氧化	將磷三酯氧化成穩定的磷酸結構
⑤ 脫保護 & 洗脫	去除保護基團，從固相物中釋放下來，得到引物

步驟 3：合成后純化

• 為了得到高純度引物，一般以下方法：

方法	說明	應用范圍
脫鹽	最基礎，用于普通 PCR、成本低	實驗室常規用途（如 HIV 檢測）
PAGE	聚丙烯酰胺凝膠純化，高分辨率	用于高精度分子克隆
HPLC	高效液相色譜純化，雜質少	qPCR / 探針 / 高保真擴增

購買引物

• 從寡核苷酸合成公司定制購買：
  在線下單：輸入序列、長度、純化方式、規模（nmol 或 OD），約 1–3 天(和純化方法有關)的合成周期，樣品多以凍干形式寄出，實驗室溶解使用（TE buffer 或無酶水）。

平臺主頁	平臺名稱	官網鏈接	平臺特點
	Thermo Fisher（賽默飛世爾）	https://primer.thermofisher.cn/	Thermo Fisher（賽默飛世爾），這是全球領先的生命科學公司之一，其 DNA 引物相關產品和儲存說明在科研中非常權威。
	金斯瑞（GenScript）	https://www.genscript.com.cn/	支持高純度（PAGE、HPLC）
	上海生工（Sangon Biotech）	https://www.sangon.com/	支持常見病毒引物查詢，DNA合成引物在線訂購操作指南
	博奧生物（Biosune）	http://www.biosune.com/	響應速度快，支持當日出庫；適合中等規模實驗需求
	齊碳科技（Tsingke）	https://www.tsingke.com/	平臺工具界面友好、下單流程清晰；性價比高，適合批量合成
	丁香通平臺	https://www.biomart.cn/product/s?wd=%E5%BC%95%E7%89%A9	聚合信息
	Bioz 平臺	bioz.com	聚合信息,PubMed 有引用

• GenScript、IDT、Sigma-Aldrich 更多相關鏈接：

  • http://www.solarbio.cc/products/show5850786.html

  • 對定制訂單感興趣？具有多達 96 個基因的 qPCR Ready 板：233 美元/板 https://sciencellonline.com/en/genes/index/index

  • 所有引物均支持 到貨時間更快，20:00之前網購常規引物當天生產
    產品價格輕松獲得 歷史訂購詳單隨時查詢 網站速度更快更流暢 訂購流程簡化 https://primer.thermofisher.cn/

  • https://www.bioon.com.cn/reagent/list.asp?sortid=7&typeid=87

  • 首頁 產品與服務 遺傳學與基因組學 定制服務 個別基因的 qPCR 引物

引物存儲

形式	推薦溫度	說明
凍干粉	-20°C（可放冰箱冷凍室）	室溫下短期（幾周）沒問題，但長期需低溫保存
溶液形式	-20°C（長期）或 4°C（短期使用）	避免頻繁凍融

溶劑	穩定性	說明
無RNA酶無菌水（ddH?O）	穩定性中等	易受pH波動或雜質影響，不推薦長期存放
TE緩沖液（10 mM Tris, 1 mM EDTA, pH 8.0）	最佳選擇	Tris緩沖pH，EDTA螯合金屬抑制核酸酶，但它可能影響某些酶反應（如酶切）

• 溶液狀態下的引物更容易降解，分裝后存儲。一次性配成多個小管（Aliquot），每管僅包含1~2周使用量。工作濃度一般為10 微摩爾/升（10 μmol/L）。高頻使用（如qPCR），可把部分溶液分裝在 4°C 保存，幾周內用完。

• 避免反復凍融，避免陽光直射，避免長時間室溫放置：

儲存條件	推薦保存時限
凍干粉，-20°C	≥ 2 年
溶液，-20°C	1~2 年
溶液，4°C	≤ 1 個月
溶液，室溫	幾小時以內（僅臨時）